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首发:~第1042章 怪病?真相大白!
免疫荧光染色!
这个实验步骤的结果,将掲示最终的答案。
若是结合,那彭月娇的怪病,或许有了新的转机。
但如果没有发生结合……恐怕所有人都会再次茫然,研究也将陷入新的怪圈之中!
此刻,即便是莫雷蒂,心情都有些紧张了。
而许秋则依旧平静。
并且,荧光染色的步骤,也经过了他的改良。
相比于常规的“单张玻片仅包被一种抗原”做法,许秋采取的方案,是用聚赖氨酸包被玻片用疏水笔划分三区,三区分别包被活菌、热灭活菌以及1tritonx-100裂解菌。
这种做法的优势很大。
一来,可以消除玻片表面性质差异导致的结合偏差。
二则是能够同时展示抗原构象变化对结合的影响。
从活菌,到热灭活菌,再到利用去污剂tritonx-100裂解细胞组织获得蛋白的裂解菌液……
说得直白一点,活菌就是全活,热灭活菌就是活一半,而裂解菌则是全死……后者的作用,是用于确定结合只发生在热灭活菌暴露的抗原表位之上。
而且在进行荧光标记时,许秋也微调了所用材料。
此前,他们用的是fitc标记。
它激发488nm,很容易与组织自发荧光混淆。
毕竟生物样本中最常见的自发荧光就是绿色,与fitc标记高度重合,很容易认错。
而许秋,则换成了alexafluor594标记。
这种标记,激发在590nm,而且颜色为红色!
几乎不会与自发荧光混淆!
“太细节了……”
“连荧光的激发与自发荧光混淆都考虑到了?”
“我之前一直用的fitc标记,有几次碰到的荧光反应很强烈,还以为是出成果了,后来才发现是样本中的脂褐素自己在发光……给我白高兴一场!”
“换用alexafluor594,则能完全避免这个问题!”
莫雷蒂等人惊叹不已。
而邱伟、张骁等科研人员,则是更加振奋。
这便是他们不愿意错过许秋的实操研究的原因了。
许秋的手术堪称完美。
而他做研究,也讲究精雕细琢。
很多细节上的处理,都极为巧妙。
作为科研人员的他们,看得爽是一回事,另外的关键在于——他们也能借此得到感悟,将同样的手法用在往后的科研之中!
这才是最大的裨益!
……
而在众人目不转睛的注视之中,实验终于到了最后阶段。
荧光染色完成。
接着,是用imagej量化荧光强度,通过对比roi内平均像素值,比较三个区域的结合差异。
所有人都紧张起来。
就连莫雷蒂,都有种手心冒汗的感觉!
这个结果,将决定今晚的努力是否白费了。
许秋的动作却很快。
他直接就开始对比三个区域。
当看到结果时,所有人的眼睛都瞪大了。
活菌区,依旧呈现出微弱非特异性荧光,且平均强度小于15au。
而1tritonx-100裂解菌区域,则完全无荧光,意味着无结合。
而中心区域,热灭活菌区,强烈的荧光信号仿佛是一轮诞生于载玻片上的太阳,极其醒目,且平均强度甚至达到了182au!
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